1、必須分清非無菌區、相對無菌區、無菌區。
2、手術間分清無菌間、有菌間。如手術間有限，應先做無菌手術。再做污染手術。
3、對感染和特異性感染等手術，所用的器械、敷料等用物要有嚴格消毒處理措施。不得與其他敷料混合，并有標記。手術后手術間地面和空氣嚴密消毒。
4、手術室洗手、護士鋪臺、刷手、穿隔離衣、戴手套和手術配合均應符合無菌操作要求。
5、巡回護士進行各種治療注射、拿放無菌物品。應符合無菌操作要求。
6、各種無菌包及無菌容器中的消毒液，由專人負責定期消毒或更換，盡量減少用浸泡消毒的器械，絲線、刀片、剪等應高壓蒸汽消毒。
7、工作人員熟悉各種消毒液的濃度及使用方法，可根據其效能定期檢測。
8、經常啟蓋的無菌盒，每周重復消毒滅菌，固定的敷料包、器械包，過期應重新滅菌。
9、每月對各項滅菌項目進行細菌監測，每月對工作人員作細菌培養，并做好記錄。
10、用紫外線殺菌燈消毒時，應有時數登記和紫外線強度監測并登記。
11、手術室應有定期清潔衛生制度，每日、每周、每月定人、定點、定時，做好清潔、消毒工作。定期做空氣培養，手術室空氣中細菌總數不得超過200個／m³。